Plásmido CRISPR de Activación (h) TPO: sc-417243-ACT

El gen humano **THPO** codifica la trombopoyetina (TPO), una citocina secretada que es el principal regulador de la proliferación de megacariocitos y de la producción de plaquetas. La TPO señaliza principalmente a través de **MPL** para activar las vías **JAK2/STAT5**, **PI3K/AKT** y **MAPK**, lo que favorece el mantenimiento de las células madre y progenitoras hematopoyéticas y su compromiso de linaje. La desregulación de la señalización **THPO–MPL** se ha asociado con alteraciones de la homeostasis plaquetaria y contribuye a la fisiopatología de las neoplasias mieloproliferativas y otros trastornos de la hematopoyesis. Como factor endocrino predominantemente hepático con control por retroalimentación mediado por la masa plaquetaria, **THPO** constituye un nodo accesible para estudiar programas transcripcionales impulsados por citocinas y la señalización del nicho hematopoyético.

TPO El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de THPO sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TPO El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus THPO en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional THPO, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TPO. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo THPO y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TPO en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TPO en células tumorales con expresión de THPO silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.