TPMT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423483

Visão geral

Tpmt codifica a tiopurina S-metiltransferase (TPMT), uma metiltransferase citosólica dependente de S-adenosil-L-metionina que catalisa a S-metilação de tiopurinas e de substratos relacionados que contêm enxofre. Em células de camundongo, a atividade da TPMT contribui para o metabolismo de xenobióticos e de análogos de nucleotídeos, moldando os pools intracelulares de nucleotídeos de tioguanina e os impactos subsequentes sobre o estresse de replicação do DNA e a sinalização de dano ao DNA. A variação na função da TPMT é amplamente usada como modelo para estudar determinantes da sensibilidade a tiopurinas e mecanismos de toxicidade hematopoética, sem implicar aplicação clínica. Assim, Tpmt é relevante para vias que conectam biotransformação de fármacos, equilíbrio redox e integridade do genoma em tecidos proliferativos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TPMT (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Tpmt em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Tpmt, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Tpmt na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TPMT.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Tpmt para a investigação da sinalização de TPMT, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Tpmt críticos para a função TPMT
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Tpmt para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TPMT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TPMT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Tpmt. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TPMT Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TPMT (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Tpmt para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Tpmt definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.