TP53INP2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-405261-LAC-2

A TP53INP2 humana (tumor protein p53 inducible nuclear protein 2; também conhecida como DOR) codifica um regulador da autofagia responsivo ao estresse, que atua como plataforma (scaffold) para o recrutamento de proteínas ATG e sustenta a formação e a maturação de autofagossomos. A TP53INP2 participa de programas de detecção de nutrientes e de regulação transcricional ligados à sinalização de p53 e à autofagia controlada por mTOR, influenciando a proteostase, o controle de qualidade mitocondrial e decisões de sobrevivência celular sob estresse metabólico. A expressão ou a localização desreguladas de TP53INP2 têm sido associadas a alterações no fluxo autofágico em contextos relevantes para a biologia do câncer, a neurodegeneração e distúrbios metabólicos, nos quais vias de depuração comprometidas podem afetar a estabilidade genômica e a inflamação. A edição gênica de TP53INP2 permite estudos mecanísticos da arquitetura da via de autofagia, de epistasia com fatores ATG centrais e de triagens de genômica funcional que conectam a sinalização de estresse a fenótipos celulares relevantes para doenças.

As Partículas de Ativação Lentivirais TP53INP2 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de TP53INP2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TP53INP2 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição TP53INP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TP53INP2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo TP53INP2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.