Towbin, with SDS, 10X

O tampão Towbin, 10X, contendo SDS (dodecil sulfato de sódio), é um reagente essencial na investigação em biologia molecular, predominantemente utilizado em técnicas de análise de proteínas como SDS-PAGE (eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio). Este tampão desempenha um papel fundamental na desnaturação das proteínas, facilitando a sua separação com base no peso molecular. A composição do tampão de Towbin, 10X, inclui normalmente base Tris, glicina e SDS. A base Tris serve como agente tamponante, mantendo um ambiente de pH estável propício à eletroforese. A glicina melhora a resolução da separação ao proporcionar um efeito de gradiente no gel. O SDS, um agente tensioativo, confere uma carga negativa às proteínas, assegurando uma migração uniforme baseada apenas no tamanho. Na investigação, o Tampão Towbin, 10X, é crucial para a preparação de amostras, particularmente em amostras de proteínas desnaturantes. Ao aquecer amostras de proteínas na presença de SDS e β-mercaptoetanol, as ligações de dissulfureto são quebradas e as proteínas são linearizadas, eliminando qualquer estrutura secundária ou terciária. Consequentemente, as proteínas ficam uniformemente revestidas com moléculas de SDS, tornando-as negativamente carregadas e permitindo a sua migração através da matriz do gel sob a influência de um campo elétrico. Os cientistas utilizam o tampão Towbin, 10X, para investigar vários aspectos da biologia das proteínas, incluindo os níveis de expressão das proteínas, as modificações pós-traducionais e as interacções proteína-proteína. Ao submeter amostras de proteínas à análise SDS-PAGE utilizando este tampão, os investigadores podem separar misturas complexas de proteínas, visualizar bandas individuais de proteínas e quantificar a abundância de proteínas. Além disso, o tampão Towbin, 10X, é essencial para o Western blotting, uma técnica utilizada para a deteção e caraterização de proteínas. Após a separação electroforética, as proteínas são transferidas do gel para uma membrana e sondadas com anticorpos específicos, permitindo a identificação de proteínas alvo numa amostra.