Topo ICRISPR激活质粒(h): sc-400965-ACT

人类 TOP1 基因编码 DNA 拓扑异构酶 I（Topo I），这是一种核内酶，通过产生瞬时的单链断裂并将 DNA 重新连接，来缓解 DNA 复制和转录过程中产生的扭转应力。该活性支持 DNA 损伤应答信号传导、染色质动态变化以及基因组稳定性的维持，从而将 TOP1 的功能与细胞周期进程和转录稳态联系起来。TOP1 表达或活性失调会改变细胞对复制应激的耐受性并影响基因组完整性——这些特征常在肿瘤生物学以及 DNA 修复受损相关研究中被关注。TOP1 依赖过程也与转录相关基因组不稳定性的研究，以及细胞对拓扑异构酶“毒化剂”（topoisomerase poisons）的应答研究密切相关。

Topo I CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TOP1的表达。

Topo I CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TOP1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TOP1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Topo I表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TOP1位点，并能够研究内源性位点上依赖于Topo I的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TOP1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Topo I通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。