TOB2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404242-ACT

ヒトTOB2（transducer of ERBB2.2）は、mRNAのターンオーバーや、細胞周期の進行および分化を制御する転写プログラムを調節する、抗増殖性のBTG/Tobファミリータンパク質をコードします。TOB2はCCR4–NOTデアデニラーゼ複合体との相互作用を介して転写後調節に関与し、TGF-β/SMAD、MAPK、増殖因子受容体ネットワークなどの経路下流におけるシグナル出力にも影響し得ます。即時早期遺伝子の発現や増殖能を形作ることから、TOB2は腫瘍生物学、免疫細胞の活性化、ストレス応答性の転写制御の研究において重要です。TOB2の発現や機能の破綻は細胞の増殖状態の変化と関連することが示されており、がん関連の遺伝子発現シグネチャーの文脈でも検討されています。

TOB2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TOB2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TOB2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TOB2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTOB2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TOB2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTOB2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTOB2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTOB2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTOB2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。