Plasmide CRISPR/Cas9 KO TNFβ (m): sc-421477
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TNFβ Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TNFβ, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TNFβ Antibody (E-6): sc-28345
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TNFβ (m) | sc-421477 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Lta code le facteur de nécrose tumorale bêta (TNFβ, également appelé lymphotoxine-α), une cytokine de la superfamille TNF principalement produite par les lymphocytes activés, qui transmet des signaux via TNFR1/TNFR2 et contribue à l’organogenèse des organes lymphoïdes ainsi qu’au dialogue inflammatoire. Le TNFβ active les voies de signalisation canoniques NF-κB et MAPK afin de réguler la survie des leucocytes, les réseaux de cytokines et l’expression des molécules d’adhérence, orientant ainsi le trafic des cellules immunitaires et le remodelage tissulaire. Dans les systèmes murins, la fonction de Lta est étroitement liée à l’organisation des structures lymphoïdes secondaires et à la coordination des réponses immunitaires adaptatives. Une signalisation TNFβ dérégulée est fréquemment étudiée dans des modèles d’inflammation chronique, d’auto-immunité et de microenvironnements immunitaires associés aux tumeurs, où les interactions entre le stroma et le système immunitaire sont modifiées.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TNFβ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lta dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lta, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lta à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TNFβ.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lta pour l'étude de la signalisation de TNFβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Lta essentiels à la fonction de TNFβ
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lta pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TNFβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TNFβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lta. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TNFβ plasmide HDR (m) et le TNFβ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lta pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lta définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.