TNFα-IP 8L3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410450-ACT

TNFAIP8L3 (TNFα-IP 8L3) é um membro da família TNFAIP8/TIPE, implicada na regulação de vias de sinalização relacionadas à imunidade, na sobrevivência celular e em respostas inflamatórias a jusante da estimulação por citocinas. Em células humanas, o TNFAIP8L3 tem sido associado à modulação de limiares de apoptose e de vias adaptativas ao estresse, com conexões funcionais a programas transcricionais associados ao NF-κB e a uma atividade mais ampla de redes induzidas por TNF. Alterações na expressão de proteínas da família TIPE têm sido relatadas em contextos de inflamação desregulada e fenótipos oncogênicos, sustentando a investigação de TNFAIP8L3 na biologia do microambiente tumoral e na sinalização de células imunes. O estudo de TNFAIP8L3 pode ajudar a esclarecer como reguladores responsivos a citocinas moldam a proliferação, a sinalização de morte e a homeostase celular.

TNFα-IP 8L3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFAIP8L3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TNFα-IP 8L3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFAIP8L3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFAIP8L3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TNFα-IP 8L3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFAIP8L3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TNFα-IP 8L3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TNFα-IP 8L3 em células tumorais com expressão de TNFAIP8L3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.