TNFα-IP 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401685-ACT

TNFAIP2 (proteína 2 induzida por TNFα; TNFα-IP 2) é um gene responsivo à inflamação, induzido por TNFα e por outros estímulos ativadores de NF-κB, ligando a sinalização por citocinas a programas de remodelação celular. A proteína tem sido implicada na regulação da dinâmica do citoesqueleto de actina, do tráfego de membranas e da motilidade celular, sustentando processos como adesão e migração em contextos imunes e estromais. A expressão de TNFAIP2 acompanha estados inflamatórios ativados e é frequentemente estudada em vias que conectam a sinalização imune inata, a ativação vascular/endotelial e a remodelação tecidual. A desregulação de TNFAIP2 tem sido associada à inflamação patológica e a fenótipos relacionados ao câncer, motivando estudos mecanísticos sobre como os outputs transcricionais dependentes de NF-κB moldam o comportamento celular.

TNFα-IP 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFAIP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TNFα-IP 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFAIP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFAIP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TNFα-IP 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFAIP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TNFα-IP 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TNFα-IP 2 em células tumorais com expressão de TNFAIP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.