TNF alpha Double Nickaseプラスミド (h): sc-400124-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- TNF alpha Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- TNF alphaダブルニカースプラスミド（h）およびTNF alphaダブルニカースプラスミド（h2）は、TNFを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: TNF alpha 抗体 (C-4): sc-133192
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
TNF alpha Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400124-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TNF alpha Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400124-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNF は腫瘍壊死因子アルファ（TNFα）をコードしており、TNFα は主に活性化マクロファージや T 細胞によって産生される、多面的な作用をもつ炎症促進性サイトカインです。TNFα は自然免疫と獲得免疫の応答を協調的に制御します。TNFα は TNFR1 および TNFR2 を介してシグナルを伝達し、標準的な NF-κB および MAPK カスケードを調節する一方で、受容体の状況や下流アダプターの動員様式に応じてアポトーシスやネクロプトーシスにも影響します。これらの経路は、感染や損傷に対する応答として、サイトカインネットワーク、白血球の動員、内皮細胞の活性化、ならびに組織リモデリングを形作ります。TNFα 活性の制御破綻は、自己免疫、炎症性腸疾患（IBD）の生物学、腫瘍微小環境におけるシグナル伝達など、慢性炎症や免疫介在性病態の研究において分子学的な指標（リードアウト）として広く用いられています。
TNF alpha ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TNF 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TNF内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TNFの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TNFが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。