TMEM97 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-411997-LAC

TMEM97 codifica a proteína transmembrana 97, um componente residente no retículo endoplasmático do complexo do receptor sigma-2, que modula a homeostase do colesterol celular e o tráfego de lipídios. TMEM97 tem sido associada à regulação da captação de lipoproteínas de baixa densidade (LDL) por meio de interações com receptores de lipoproteínas e a processos mais amplos de organização de membranas que influenciam a sinalização e a adaptação metabólica. Ao moldar a distribuição de esteróis e a proteostase na via secretória, TMEM97 pode impactar redes de resposta ao estresse e a função de organelas. Alterações na expressão de TMEM97 e na biologia associada ao receptor sigma-2 têm sido investigadas em contextos que incluem neurodegeneração, desregulação metabólica e mudanças de estado celular relacionadas ao câncer, sustentando sua utilidade como alvo mecanístico em estudos de vias.

As Partículas de Ativação Lentivirais TMEM97 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de TMEM97 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TMEM97 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição TMEM97, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TMEM97. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo TMEM97 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.