TMEM192 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-415021-LAC

TMEM192 codifica uma proteína transmembranar de múltiplas passagens que se localiza predominantemente em endossomos tardios e lisossomos, onde é usada como marcador de membranas lisossomais e está implicada na organização de membranas e na homeostase de organelos. Ao influenciar processos relacionados com os lisossomos, como o tráfego vesicular, a renovação/degradação de cargas e as respostas ao stress celular, o TMEM192 pode modular vias ligadas à função autófago–lisossomo e à maturação endolisossomal. A desregulação da dinâmica lisossomal e da proteostase é relevante para mecanismos estudados em neurodegeneração, stress metabólico e adaptação de células cancerígenas, tornando o TMEM192 um ponto de entrada útil para investigar fenótipos centrados em organelos. A medição de alterações associadas ao TMEM192 na abundância lisossomal, acidificação e tráfego pode apoiar estudos de depuração do proteoma e de remodelação de compartimentos intracelulares.

As Partículas de Ativação Lentivirais TMEM192 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de TMEM192 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TMEM192 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição TMEM192, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TMEM192. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo TMEM192 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.