TMEM173 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403148-ACT

TMEM173 codifica a STING, um adaptador residente no retículo endoplasmático que detecta DNA citosólico por meio de dinucleotídeos cíclicos gerados pela cGAS e inicia a sinalização da imunidade inata. Após a ativação, a STING trafega para o complexo de Golgi e promove a fosforilação de IRF3 e NF-κB dependente de TBK1 e IKK, impulsionando programas de transcrição de interferons do tipo I e citocinas inflamatórias. Essa via integra respostas a dano no DNA, defesa antimicrobiana e morte celular imunogênica, e é rigidamente regulada para evitar inflamação aberrante. A atividade desregulada de STING tem sido associada a fenótipos autoinflamatórios, interferonopatias e interações tumor–sistema imune alteradas, tornando TMEM173 um nó-chave em pesquisas de imunologia e biologia do câncer.

TMEM173 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMEM173 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMEM173 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMEM173 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMEM173, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMEM173. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMEM173 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMEM173 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMEM173 em células tumorais com expressão de TMEM173 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.