TMEM143 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412498-ACT

TMEM143 codifica uma proteína transmembrana multipasso que se acredita localizar-se em membranas intracelulares e contribuir para a organização de membranas e para processos de tráfego que moldam a homeostase das organelas. Como um membro da família TMEM ainda pouco caracterizado, o TMEM143 é estudado no contexto de sinalização compartimentalizada, triagem/classificação de proteínas e remodelamento adaptativo ao estresse de sistemas de membranas. A desregulação de proteínas transmembrana e de tráfego é frequentemente associada a alterações no controle do estado celular, incluindo mudanças em proliferação, diferenciação e tolerância ao estresse, tornando o TMEM143 relevante para estudos mecanísticos de adaptação celular. A medição da expressão e da função de TMEM143 pode apoiar esforços de mapeamento de vias em redes de sinalização associadas a membranas e a descoberta de fenótipos em modelos celulares humanos.

TMEM143 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMEM143 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMEM143 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMEM143 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMEM143, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMEM143. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMEM143 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMEM143 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMEM143 em células tumorais com expressão de TMEM143 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.