TMEM125 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-414318-ACT

O TMEM125 humano codifica uma proteína transmembrana prevista de múltiplas passagens, com anotação funcional limitada, o que é consistente com possíveis papéis na organização de membranas e na regulação da sinalização intracelular. Como um fator putativamente associado a membranas, o TMEM125 é estudado no contexto da homeostase de organelos, do tráfego proteico e de vias responsivas ao stress que influenciam a sobrevivência e a adaptação celular. Conjuntos de dados transcriptómicos e de associação genética têm relacionado alterações na expressão de TMEM125 com estados celulares relevantes para doenças, incluindo programas metabólicos e inflamatórios alterados, tornando-o de interesse para caracterização mecanística. A modulação experimental de TMEM125 apoia esforços de mapeamento de vias, nos quais proteínas de membrana podem moldar a sinalização próxima de recetores, a dinâmica vesicular e as respostas transcricionais a jusante.

TMEM125 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMEM125 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMEM125 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMEM125 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMEM125, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMEM125. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMEM125 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMEM125 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMEM125 em células tumorais com expressão de TMEM125 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.