TMED2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402765-ACT

TMED2 (proteína 2 de tráfego p24 transmembranar) é uma proteína de membrana do tipo I da família de receptores de carga p24 que cicla entre o retículo endoplasmático e o complexo de Golgi para regular o brotamento de vesículas, a seleção de carga e a homeostase da via secretória. Ao participar do tráfego dependente de COPI/COPII e do controle de qualidade inicial da secreção, a TMED2 influencia a maturação e o transporte até a superfície celular de múltiplas proteínas de membrana e secretadas. Alterações no tráfego secretório e na dinâmica de transporte entre RE e Golgi são frequentemente associadas a respostas ao estresse de proteostase e a mudanças na saída de sinalização celular. A desregulação de membros da família p24, incluindo a TMED2, tem sido associada na literatura à biologia tumoral e a outras condições em que secreção aberrante, tráfego de receptores e vias celulares de estresse contribuem para fenótipos relevantes para a doença.

TMED2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMED2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMED2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMED2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMED2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMED2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMED2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMED2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMED2 em células tumorais com expressão de TMED2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.