TMC8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406378

Visão geral

TMC8 (canal transmembranar semelhante 8; também conhecido como EVER2) codifica uma proteína de membrana multipasso implicada na regulação da sinalização em queratinócitos e células imunes, com papéis descritos no controle da homeostase intracelular de zinco e de respostas transcricionais a jusante. Tem sido associado a vias que influenciam a defesa antiviral, a diferenciação epidérmica e a sinalização inflamatória, incluindo, em certos contextos, a modulação de respostas associadas ao NF-κB. Alterações genéticas em TMC8 estão associadas à suscetibilidade à epidermodisplasia verruciforme e a um controle do hospedeiro alterado sobre infecções cutâneas por papilomavírus humano, o que reforça sua relevância em estudos de biologia da barreira cutânea e de interações vírus–hospedeiro. Como fator associado à membrana, o TMC8 é frequentemente investigado para entender como a sinalização dependente de íons se integra à imunidade epitelial e à persistência da infecção viral.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TMC8 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TMC8 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TMC8, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TMC8 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TMC8.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TMC8 para a investigação da sinalização de TMC8, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TMC8 críticos para a função TMC8
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TMC8 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TMC8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TMC8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TMC8. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TMC8 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TMC8 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TMC8 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TMC8 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.