TLR8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401721-ACT

O TLR8 humano (receptor Toll-like 8) é um receptor endossomal de reconhecimento de padrões que detecta RNA de fita simples rico em uridina proveniente de patógenos e de células danificadas, iniciando a sinalização imune inata. Após a ativação, o TLR8 aciona cascatas dependentes de MyD88 que promovem programas transcricionais mediados por NF-κB e IRFs, estimulando a expressão de citocinas e quimiocinas inflamatórias e modulando a função de células apresentadoras de antígeno. A atividade do TLR8 influencia as respostas de monócitos/macrófagos e de células dendríticas e se integra a vias relacionadas a interferons e ao inflamassoma que coordenam a defesa antimicrobiana. A desregulação da sinalização do TLR8 tem sido associada a estados inflamatórios anormais e a mecanismos de doenças imunomediadas, tornando-o um ponto útil para estudar a regulação da imunidade inata e as interações hospedeiro–patógeno.

TLR8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TLR8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TLR8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TLR8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TLR8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TLR8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TLR8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TLR8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TLR8 em células tumorais com expressão de TLR8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.