TLR3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-400512-LAC-2

O TLR3 humano (receptor do tipo Toll 3) codifica um receptor endossomal de reconhecimento de padrões que detecta RNA viral de dupla fita e o análogo sintético poli(I:C), iniciando a sinalização imune inata por meio do adaptador TRIF para ativar IRF3/IRF7 e NF-κB e induzir interferons do tipo I e citocinas pró-inflamatórias. A atividade do TLR3 interage com programas de restrição antiviral, maturação de células dendríticas e redes transcricionais inflamatórias, podendo também modular vias de morte celular em determinados contextos de estresse. Variações genéticas ou sinalização desregulada do TLR3 têm sido associadas a suscetibilidade alterada a infecções virais e a fenótipos inflamatórios mediados pelo sistema imune, tornando-o relevante para estudos de interações hospedeiro–patógeno, biologia do interferon e neuroinflamação. A edição gênica de TLR3 permite a dissecação mecanística da detecção endossomal de ácidos nucleicos, do crosstalk de vias com a sinalização de RIG-I/MDA5 e de triagens de genômica funcional em modelos imunológicos e epiteliais.

As Partículas de Ativação Lentivirais TLR3 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de TLR3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TLR3 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição TLR3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TLR3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo TLR3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.