Partículas Lentivirales de Activación (h2) TLR3: sc-400512-LAC-2

El TLR3 humano (receptor tipo Toll 3) codifica un receptor endosomal de reconocimiento de patrones que detecta ARN viral de doble cadena y el análogo sintético poli(I:C), iniciando la señalización de la inmunidad innata a través del adaptador TRIF para activar IRF3/IRF7 y NF-κB e inducir interferones de tipo I y citocinas proinflamatorias; la actividad de TLR3 se integra con programas de restricción antiviral, la maduración de las células dendríticas y redes transcripcionales inflamatorias, y en determinados contextos de estrés puede modular vías de muerte celular; la variación genética o la desregulación de la señalización de TLR3 se ha asociado con cambios en la susceptibilidad a infecciones virales y con fenotipos inflamatorios mediadas por el sistema inmunitario, lo que lo hace relevante para estudios de interacciones huésped–patógeno, biología del interferón y neuroinflamación; la edición génica de TLR3 permite el análisis mecanístico de la detección endosomal de ácidos nucleicos, el crosstalk de la vía con la señalización de RIG-I/MDA5 y cribados de genómica funcional en modelos inmunitarios y epiteliales.

Las partículas de activación lentiviral TLR3 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TLR3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TLR3 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TLR3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TLR3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TLR3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.