TLR3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400512-ACT

TLR3 (receptor do tipo Toll 3) é um receptor endossomal de reconhecimento de padrões que detecta RNA de dupla fita produzido durante infecções virais ou liberado por células danificadas. Após a ligação ao ligante, o TLR3 sinaliza por meio do adaptador TRIF para ativar as vias de IRF3/IRF7 e NF-κB, promovendo a produção de interferon tipo I e a expressão de citocinas pró-inflamatórias. Esse eixo da imunidade inata molda programas de restrição antiviral, a maturação de células dendríticas e a comunicação com a imunidade adaptativa. A atividade desregulada do TLR3 tem sido implicada em alterações na defesa do hospedeiro e em patologia inflamatória, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de sinalização de interferon, neuroinflamação e interações entre tumor e sistema imune.

TLR3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TLR3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TLR3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TLR3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TLR3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TLR3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TLR3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TLR3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TLR3 em células tumorais com expressão de TLR3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.