TLR3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400512-ACT

TLR3（Toll様受容体3）は、ウイルス感染時に産生される二本鎖RNAや、損傷した細胞から放出される二本鎖RNAを検知するエンドソーム局在のパターン認識受容体です。リガンド結合後、TLR3はアダプター分子TRIFを介してシグナルを伝達し、IRF3/IRF7およびNF-κB経路を活性化することで、I型インターフェロンの産生と炎症性サイトカインの発現を誘導します。この自然免疫の軸は、抗ウイルス制限プログラム、樹状細胞の成熟、ならびに獲得免疫とのクロストークを形成します。TLR3活性の制御破綻は、宿主防御の変化や炎症性病態に関与することが示唆されており、インターフェロンシグナル、神経炎症、腫瘍—免疫相互作用の研究における機序解明の要所として利用されています。

TLR3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TLR3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TLR3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TLR3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTLR3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TLR3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTLR3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTLR3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTLR3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTLR3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。