TLR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400267-ACT

O TLR2 humano codifica o receptor do tipo Toll 2, um recetor de reconhecimento de padrões que deteta lipoproteínas bacterianas e outros componentes microbianos em cooperação com parceiros heterodiméricos como o TLR1 e o TLR6. Após a ligação do ligando, o TLR2 sinaliza principalmente através de vias dependentes de MYD88 para ativar cascatas IRAK–TRAF6, promovendo a sinalização de NF-κB e MAPK e a indução de citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias. A atividade do TLR2 molda a ativação imunitária inata, a maturação de células dendríticas e a comunicação com a imunidade adaptativa, com efeitos a jusante em programas associados a interferão e ao inflamassoma de forma dependente do contexto. A sinalização desregulada do TLR2 tem sido implicada em condições inflamatórias crónicas, imunopatologia associada a infeções e inflamação associada a tumores, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de regulação imunitária.

TLR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TLR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TLR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TLR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TLR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TLR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TLR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TLR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TLR2 em células tumorais com expressão de TLR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.