TIRAP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402650-ACT

O TIRAP humano (também conhecido como MAL) codifica uma proteína adaptadora que conecta receptores do tipo Toll (TLRs), particularmente TLR2 e TLR4, a cascatas de sinalização a jusante na imunidade inata. Ao fazer a ponte entre complexos proximais ao receptor e a sinalização dependente de MyD88, o TIRAP promove a ativação das vias NF-κB e MAPK e molda programas de citocinas e quimiocinas inflamatórias. Sua regulação influencia respostas antimicrobianas, ativação de células imunes e o crosstalk com redes associadas a interferons. A desregulação da sinalização de TIRAP tem sido associada à suscetibilidade a doenças inflamatórias e infecciosas e é frequentemente estudada pelo seu impacto na inflamação associada a tumores e em mecanismos de evasão imune.

TIRAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TIRAP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TIRAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TIRAP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TIRAP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TIRAP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TIRAP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TIRAP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TIRAP em células tumorais com expressão de TIRAP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.