TIM CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-423480

개요

마우스 Tpi1은 트리오스인산 이성질화효소(TIM)를 암호화하며, TIM은 디하이드록시아세톤 인산(DHAP)과 글리세르알데하이드-3-인산(G3P) 사이의 가역적 상호전환을 촉매하는 해당과정의 핵심 효소입니다. TIM은 해당과정을 통한 효율적인 대사 흐름(플럭스)을 유지함으로써 세포의 ATP 생산, 산화환원 균형, 그리고 오탄당인산경로(PPP) 및 TCA 회로로의 보충 반응(anaplerotic input)과 같은 경로들과의 대사적 연계를 뒷받침합니다. 따라서 Tpi1 활성은 증식 조직과 분화 조직 모두에서 생물에너지 항상성에 필수적이며, 그 이상 조절은 대사 스트레스 반응, 저산소 적응, 해당과정 의존적 표현형 연구와 관련성이 큽니다. Tpi1이 관여하는 해당과정 조절의 변화는 신경계 기능 이상, 용혈성 병리, 그리고 암 관련 대사 재프로그래밍 모델에서도 흔히 분석됩니다.

TIM CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Tpi1 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 Tpi1 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 Tpi1의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 TIM 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 TIM 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 Tpi1 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• TIM 기능에 중요한 Tpi1 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 Tpi1 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• TIM CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 TIM CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Tpi1 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  TIM HDR 플라스미드 (m) 및 TIM HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 Tpi1 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 Tpi1 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.