TIF1α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403838-ACT

TRIM24 (TIF1α) é um correulador transcricional nuclear que integra sinais da cromatina com a sinalização por hormônios e fatores de crescimento para modular programas de expressão gênica que controlam a proliferação, a diferenciação e as respostas ao estresse celular. Ele contém um módulo PHD-bromodomínio que reconhece modificações específicas de histonas, conectando o estado epigenético ao recrutamento da maquinaria transcricional em regiões promotoras e intensificadoras (enhancers). O TRIM24 influencia vias que envolvem sinalização de receptores nucleares e remodelamento de cromatina, e alterações na atividade ou na expressão de TRIM24 têm sido associadas a redes transcricionais desreguladas na biologia do câncer e em outras doenças caracterizadas por controle epigenético aberrante. Como membro da família de ligases E3 de ubiquitina, ele também pode interagir com a estabilidade proteica e a renovação de cofatores, fornecendo uma ponte mecanística entre a regulação da cromatina e a proteostase.

TIF1α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRIM24 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TIF1α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRIM24 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRIM24, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TIF1α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRIM24 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TIF1α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TIF1α em células tumorais com expressão de TRIM24 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.