TICAM-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-414627-ACT

TICAM1 codifica a TICAM-1 (também conhecida como TRIF), um adaptador essencial na sinalização imune inata a jusante de TLR3 e TLR4, que conecta a ativação de receptores de reconhecimento de padrões a programas transcricionais dependentes de IRF3/IRF7 e de NF-κB. Por meio do recrutamento de TBK1 e IKKε e da integração com nós de sinalização TRAF/RIPK1, a TICAM-1 coordena a produção de interferon tipo I, a indução de citocinas inflamatórias e vias de morte celular programada. A sinalização desregulada de TICAM1 tem sido associada a respostas antivirais alteradas e inflamação aberrante, sendo frequentemente investigada no contexto da biologia de doenças infecciosas e mediadas pelo sistema imune. Como resultado, TICAM1 é amplamente utilizada como ferramenta mecanística para estudar vias imunes inatas dependentes de TLR e sua interação com redes de estresse celular e de citocinas.

TICAM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TICAM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TICAM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TICAM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TICAM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TICAM-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TICAM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TICAM-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TICAM-1 em células tumorais com expressão de TICAM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.