Plásmido CRISPR de Activación (h) TIAR: sc-401247-ACT

El gen humano **TIAL1** codifica **TIAR**, una proteína de unión a ARN que reconoce elementos ricos en uridina (U) para regular el empalme (splicing) del pre-ARNm, la estabilidad del ARNm y la traducción. TIAR es un componente central de los gránulos de estrés y participa en programas de control postranscripcional que remodelan la expresión génica durante el estrés celular, la señalización inmunitaria innata y la apoptosis. Mediante la modulación de transcritos de citocinas y relacionados con el crecimiento, TIAR ayuda a coordinar el metabolismo del ARN con las vías de señalización que gobiernan la proliferación y las respuestas inflamatorias. La actividad desregulada de TIAR y la dinámica de los gránulos de estrés se han vinculado con la neurodegeneración, la autoinmunidad y fenotipos relevantes para el cáncer, lo que convierte a TIAL1 en un punto de interés para estudiar redes de regulación del ARN y cambios transcriptómicos asociados a enfermedad.

TIAR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TIAL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TIAR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TIAL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TIAL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TIAR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TIAL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TIAR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TIAR en células tumorales con expresión de TIAL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.