Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
THP CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-423607
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- THP CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在THP基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：THP: sc-271022，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
THP CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-423607 | 20 µg | $397.00 |
概述
Umod 编码 Tamm–Horsfall 蛋白（THP，又称尿调蛋白 uromodulin），它是哺乳动物尿液中分泌量最高的糖蛋白，由肾单位粗升支和远曲小管早段的上皮细胞产生。THP 被释放到肾小管腔内，在其中维持上皮稳态；通过与 NKCC2 依赖的 NaCl 重吸收等转运过程相互作用来调节离子处理；并通过形成聚合体帮助塑造尿液蛋白网络。UMOD 通过影响肾小管应激反应、先天免疫信号以及上皮分化程序，从而影响肾脏生理功能及对肾小管间质损伤的易感性。Umod 的遗传或功能扰动与多种肾脏疾病表型相关，包括尿调蛋白相关性肾病、高尿酸相关性状以及慢性肾病风险，因此它是在小鼠模型中开展机制研究的关键基因位点。
THP CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Umod基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Umod基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Umod开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使THP蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Umod缺失的细胞模型，用于THP信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 THP 功能至关重要的 Umod 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Umod 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 THP CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 THP CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Umod 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 THP HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 THP HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Umod同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Umod靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。