TGN38 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401763-ACT

TGOLN2 codifica a TGN38, uma glicoproteína transmembranar do tipo I enriquecida na rede trans-Golgi que atua como fator de triagem e tráfego de cargas de membrana e secretórias. Por meio de motivos de direcionamento citosólicos e de interações com proteínas adaptadoras, a TGN38 contribui para o brotamento de vesículas, para a reciclagem de endossomos para o TGN e para a manutenção da arquitetura do Golgi, influenciando assim a maturação proteica e a organização espacial de receptores de sinalização. Esses processos conectam a TGOLN2 a vias centrais de transporte intracelular, processamento de glicoproteínas e secreção regulada. A desregulação do tráfego de membranas e da homeostase do Golgi está implicada na invasão de células cancerosas, na neurodegeneração e em alterações de sinalização imune, tornando a TGOLN2 um ponto útil para estudos mecanísticos sobre dinâmica de organelas e proteostase.

TGN38 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TGOLN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TGN38 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TGOLN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TGOLN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TGN38. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TGOLN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TGN38 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TGN38 em células tumorais com expressão de TGOLN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.