TGF beta Receptor 3/TGFBR3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-401316-ACT-2

O TGFBR3 humano (receptor de TGF‑β tipo III; betaglicano) é um proteoglicano de membrana que atua como co-receptor, regulando a apresentação de ligantes e a especificidade de sinalização dentro da superfamília do TGF‑β, incluindo TGF‑βs e alguns BMPs selecionados. Ao modular a montagem do complexo de receptores e a disponibilidade de ligantes na superfície celular, o TGFBR3 influencia programas transcricionais dependentes de SMAD, bem como vias não canônicas associadas à transição epitélio–mesênquima, à remodelação da matriz extracelular e à migração celular. Alterações na expressão do TGFBR3 ou no seu “shedding” (liberação/clivagem da porção extracelular) têm sido implicadas na desregulação da sinalização de TGF‑β observada na fibrose e em mudanças do microambiente associadas ao câncer, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos. Reagentes para TGFBR3 permitem investigar o crosstalk entre vias, o tráfego de receptores e o shedding do ectodomínio, além de respostas específicas do contexto celular em modelos de células humanas.

TGF beta Receptor 3/TGFBR3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TGFBR3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TGF beta Receptor 3/TGFBR3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TGFBR3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TGFBR3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TGF beta Receptor 3/TGFBR3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TGFBR3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TGF beta Receptor 3/TGFBR3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TGF beta Receptor 3/TGFBR3 em células tumorais com expressão de TGFBR3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.