TGF beta Receptor 1/TGFBR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400153-ACT

TGFBR1 (receptor de TGF beta 1; ALK5) codifica uma quinase transmembranar de serina/treonina que atua como receptor central para ligantes de TGF-β. Após a ligação do ligante e a formação de complexo com TGFBR2, o TGFBR1 propaga a sinalização canônica via SMAD2/3 e também se integra a vias não canônicas de MAPK, PI3K/AKT e GTPases do tipo Rho para regular a transição epitélio–mesênquima, a remodelação da matriz extracelular, o controle do ciclo celular e a modulação imune. A sinalização desregulada de TGFBR1 está implicada em fibrose, respostas inflamatórias aberrantes e na biologia do microambiente tumoral, em que alterações dependentes do contexto na saída da via podem modificar o controle de crescimento e a plasticidade celular. Como um nó sinalizador a montante, o TGFBR1 é amplamente estudado por seu papel no padrão de desenvolvimento, na homeostase tecidual e na comunicação cruzada entre vias que molda programas transcricionais.

TGF beta Receptor 1/TGFBR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TGFBR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TGF beta Receptor 1/TGFBR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TGFBR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TGFBR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TGF beta Receptor 1/TGFBR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TGFBR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TGF beta Receptor 1/TGFBR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TGF beta Receptor 1/TGFBR1 em células tumorais com expressão de TGFBR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.