TGFβ2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423367-ACT

O Tgfb2 de camundongo codifica o fator de crescimento transformador beta 2 (TGFβ2), uma citocina secretada que sinaliza por meio dos receptores de TGFβ para ativar programas transcricionais dependentes de SMAD2/3 e uma comunicação cruzada mais ampla com as vias MAPK e PI3K. O TGFβ2 regula o desenvolvimento embrionário, o padrão tecidual, a deposição de matriz extracelular, a modulação imune e a transição epitélio–mesênquima, influenciando decisões de destino celular e a remodelação do estroma. A sinalização desregulada de TGFβ2 tem sido implicada em processos fibróticos, angiogênese aberrante e interações tumor–microambiente que moldam a invasão e a evasão imunológica. Assim, o Tgfb2 é amplamente estudado por seus papéis na diferenciação, na resposta a feridas e em vias de remodelação relevantes para doenças em modelos murinos.

TGFβ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tgfb2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TGFβ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tgfb2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tgfb2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TGFβ2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tgfb2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TGFβ2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TGFβ2 em células tumorais com expressão de Tgfb2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.