TGF beta 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423364-ACT

O Tgfb1 de camundongo codifica o fator de crescimento transformador beta 1 (TGF beta 1), uma citocina secretada que sinaliza principalmente por meio de TGFBR1/2 para ativar a transcrição dependente de SMAD2/3 e interagir com vias não canônicas de MAPK, PI3K/AKT e Rho GTPases. O TGF beta 1 é um regulador central da remodelação da matriz extracelular, da transição epitélio-mesenquimal, da diferenciação de células imunes e da manutenção da homeostase tecidual. A atividade desregulada de Tgfb1 está amplamente implicada na remodelação fibrótica, em imunossupressão ou inflamação aberrantes, em reparo de feridas prejudicado e em interações entre tumor e estroma. Em modelos murinos, a perturbação de Tgfb1 é amplamente utilizada para investigar a sinalização estromal, a polarização de macrófagos e células T e o controle do crescimento dependente do contexto no desenvolvimento e em fenótipos semelhantes a doenças.

TGF beta 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tgfb1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TGF beta 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tgfb1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tgfb1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TGF beta 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tgfb1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TGF beta 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TGF beta 1 em células tumorais com expressão de Tgfb1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.