TGFα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401563-ACT

TGFA codifica o fator de crescimento transformador alfa (TGFα), um ligante secretado de EGFR que estimula a sinalização de receptores tirosina-quinase para regular a proliferação, a sobrevivência e a migração epiteliais. Após o engajamento do EGFR, o TGFα promove a atividade a jusante das vias RAS–RAF–MEK–ERK e PI3K–AKT, influenciando a progressão do ciclo celular e programas de diferenciação. A sinalização desregulada de TGFA/EGFR é frequentemente estudada em contextos de controle de crescimento aberrante e remodelamento tecidual, com relevância para redes de sinalização oncogênica e microambientes inflamatórios. Como fator autócrino/parácrino, o TGFα é comumente usado para investigar a ativação do receptor induzida por ligante, a regulação por feedback e a comunicação cruzada entre vias em modelos celulares humanos.

TGFα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TGFA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TGFα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TGFA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TGFA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TGFα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TGFA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TGFα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TGFα em células tumorais com expressão de TGFA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.