TGase3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406800

概要

TGM3はトランスグルタミナーゼ3（TGase3）をコードしており、カルシウム依存性の酵素として、ε-(γ-グルタミル)リジンのイソペプチド結合を形成することでタンパク質の架橋反応を触媒する。TGase3は終末分化プログラムにおける役割でよく知られており、上皮の成熟およびバリア形成の過程で、細胞骨格や細胞外タンパク質集合体の安定化に寄与する。その活性は、ケラチノサイトの分化、創傷修復、構造タンパク質のリモデリングを制御する経路と交差しており、酵素的な架橋反応を組織恒常性と結び付けている。トランスグルタミナーゼ活性の破綻やTGM3発現の変化は、上皮組織における炎症性および腫瘍性の過程と関連づけられており、疾患に関連する分化状態や腫瘍生物学におけるTGase3の検討を支持する。

TGase3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTGM3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TGM3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TGM3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TGase3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TGase3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TGM3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TGase3の機能に不可欠なTGM3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TGM3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TGase3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTGase3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TGM3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TGase3 HDRプラスミド（h）および TGase3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTGM3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTGM3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。