TGase1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401487-ACT

O TGM1 humano codifica a transglutaminase 1 (TGase1), uma enzima dependente de Ca2+ que catalisa ligações cruzadas ε-(γ-glutamil)lisina entre proteínas estruturais durante a diferenciação terminal dos queratinócitos. A TGase1 é um componente central da montagem do envelope cornificado epidérmico, integrando sinais dos programas de queratinização e formação da barreira para estabilizar o estrato córneo. Sua atividade conecta alterações dependentes da diferenciação na disponibilidade de substratos com a sinalização por cálcio e a proteostase na epiderme superior. A desregulação da função do TGM1 está associada a distúrbios hereditários da integridade da barreira cutânea e à cornificação anormal, tornando-o um marcador útil e um nó mecanístico para o estudo da diferenciação epidérmica e da biologia da barreira.

TGase1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TGM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TGase1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TGM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TGM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TGase1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TGM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TGase1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TGase1 em células tumorais com expressão de TGM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.