TET1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424616-ACT

O gene Tet1 de camundongo codifica a dioxigenase TET1, um regulador epigenético essencial que catalisa a oxidação da 5-metilcitosina em 5-hidroximetilcitosina e derivados relacionados, promovendo a desmetilação do DNA e moldando a acessibilidade da cromatina. A atividade de TET1 influencia programas transcricionais que governam o desenvolvimento embrionário, o comprometimento de linhagem, a regulação de genes neuronais e a manutenção da identidade celular, por meio da coordenação com vias de metilação e de remodelamento da cromatina. Ao modular as paisagens de metilação em CpGs, TET1 impacta a estabilidade do genoma e a função de enhancers e promotores, o que a vincula à diferenciação desregulada e a estados aberrantes de expressão gênica observados em diversos modelos relevantes para doenças. Em sistemas murinos, a perturbação de Tet1 é comumente estudada no contexto do neurodesenvolvimento, da biologia de células-tronco e da dinâmica do epigenoma que afeta respostas ao estresse celular e a sinalização inflamatória.

TET1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tet1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TET1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tet1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tet1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TET1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tet1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TET1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TET1 em células tumorais com expressão de Tet1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.