Tescalcin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408244-ACT

O TESC humano codifica a tescalcin, uma proteína ligante de Ca2+ com um motivo EF-hand que atua como moduladora de sinalização no citosol e nas membranas. A tescalcin tem sido implicada no acoplamento do fluxo de cálcio a redes de interação proteína–proteína que influenciam a sinalização MAPK/ERK, a regulação de transportadores iônicos e programas de diferenciação celular, particularmente em linhagens hematopoéticas. Por essas vias, o TESC pode afetar a proliferação, a migração e o comprometimento de linhagem de maneira dependente do contexto. Alterações na expressão de TESC foram relatadas em estados transcricionais relevantes para câncer e em fenótipos associados à diferenciação, tornando-o útil para estudos mecanísticos de sinalização dependente de cálcio e de redes regulatórias gênicas.

Tescalcin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TESC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tescalcin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TESC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TESC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tescalcin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TESC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tescalcin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tescalcin em células tumorais com expressão de TESC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.