TEM5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407178

Visão geral

ADGRA2 (TEM5) codifica um receptor acoplado à proteína G do tipo adesão, com uma grande região extracelular que favorece interações célula–célula e célula–matriz e conecta sinais extracelulares à sinalização intracelular. Como membro da família dos GPCRs de adesão, o TEM5 está associado a processos como o comportamento de células endoteliais, remodelamento vascular e tecidual e regulação da organização do citoesqueleto por meio de vias ligadas a GPCR. A expressão de TEM5 foi relatada em contextos relevantes para a vasculatura associada a tumores e para o remodelamento do estroma, o que o torna de interesse para estudos de sinalização angiogênica e regulação do microambiente. A dissecação da função de ADGRA2 pode ajudar a esclarecer como a sinalização de GPCRs de adesão integra a dinâmica de adesão extracelular com respostas transcricionais e do citoesqueleto em células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TEM5 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ADGRA2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ADGRA2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ADGRA2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TEM5.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ADGRA2 para a investigação da sinalização de TEM5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ADGRA2 críticos para a função TEM5
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ADGRA2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo TEM5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo TEM5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ADGRA2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo TEM5 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR TEM5 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ADGRA2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ADGRA2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.