Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
TdT Antibody (C-11) Alexa Fluor® 488: sc-393710 AF488. Direct fluorescent western blot analysis of TdT expression in Jurkat nuclear extract (A), MOLT-4 whole cell lysate (B) and mouse thymus tissue extract (C). Blocked with UltraCruz® Blocking Reagent: sc-516214. Cruz Marker™ Molecular Weight Standards detected with Cruz Marker MW Tag-Alexa Fluor® 647: sc-516791.
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TdT CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-423324
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- TdT CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在TdT基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：TdT: sc-393710，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
TdT CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-423324 | 20 µg | $397.00 |
概述
DNA 核苷酸外转移酶（Dntt）编码末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）。TdT 是一种不依赖模板的 DNA 聚合酶，能够在 V(D)J 重排连接处添加非模板来源的核苷酸，从而产生 N 区多样性。TdT 在发育中的淋巴细胞进行抗原受体基因组装时发挥作用，通过调控末端连接结果和连接处加工过程影响免疫受体库的广度。其活性与参与解决重排中间体的 DNA 双链断裂修复及非同源末端连接（NHEJ）因子相互交织。Dntt 表达失调或 TdT 活性异常被广泛用作未成熟淋巴细胞状态的分子特征，并与研究淋巴细胞发育机制以及重排过程中基因组完整性相关。
TdT CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Dntt基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Dntt基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Dntt开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使TdT蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Dntt缺失的细胞模型，用于TdT信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 TdT 功能至关重要的 Dntt 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Dntt 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 TdT CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 TdT CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Dntt 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 TdT HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 TdT HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Dntt同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Dntt靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。