Tctex1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402886-ACT

O gene humano DYNLT1 codifica a Tctex1, uma cadeia leve de dineína que se associa à dineína citoplasmática para sustentar o transporte baseado em microtúbulos, o posicionamento de organelos e o tráfego intracelular. Por meio de interações no complexo motor dineína–dinactina, a Tctex1 contribui para processos como a organização do fuso mitótico, a função do centrossomo e o movimento de cargas, que moldam a polaridade e a divisão celular. O transporte dependente de DYNLT1 tem sido associado à biologia neuronal e ciliar por meio da regulação da localização de proteínas e da compartimentalização de vias de sinalização. A desregulação de vias de transporte associadas à dineína é frequentemente estudada no contexto de mecanismos neurodegenerativos e de estados proliferativos alterados, tornando o DYNLT1 um ponto útil para investigar a dinâmica do citoesqueleto e os desfechos de sinalização.

Tctex1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DYNLT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tctex1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DYNLT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DYNLT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tctex1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DYNLT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tctex1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tctex1 em células tumorais com expressão de DYNLT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.