TCF-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400821-ACT

O TCF7L1 humano codifica o fator de transcrição TCF-3, uma proteína de ligação ao DNA do tipo high-mobility group (HMG) que interage com a β-catenina para regular a expressão de genes responsivos à via Wnt/β-catenina. O TCF-3 atua como represssor ou ativador transcricional de forma dependente do contexto, integrando complexos correpressores e remodelamento de cromatina para moldar a especificação de linhagens, a diferenciação epitelial e programas transcricionais com características de células-tronco. Por meio da modulação das saídas da sinalização Wnt, o TCF-3 influencia o controle do ciclo celular, o padrão de desenvolvimento e a estabilidade de redes transcricionais. A atividade Wnt–TCF/LEF desregulada e alterações na expressão de TCF7L1 têm sido associadas a estados transcricionais oncogênicos e à diferenciação aberrante em múltiplos contextos celulares relevantes para doenças.

TCF-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TCF7L1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TCF-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TCF7L1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TCF7L1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TCF-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TCF7L1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TCF-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TCF-3 em células tumorais com expressão de TCF7L1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.