TCF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401584

概要

TCF7はTCF-1をコードしており、TCF-1はT細胞に特異的に発現するHMGボックス型転写因子で、正統的Wnt/β-カテニンシグナル伝達を系譜決定に関わる遺伝子プログラムと統合します。TCF-1は胸腺細胞の発生を形作り、T細胞前駆細胞の維持を支えるとともに、β-カテニンやGroucho/TLEなどの補因子と協調して、状況依存的な転写の活性化または抑制を介し分化の意思決定を制御します。成熟リンパ球では、TCF-1はエフェクター状態とメモリー関連状態のバランスに影響し、免疫恒常性を司るクロマチンおよび転写ネットワークにも寄与します。TCF7/TCF-1依存性プログラムの破綻は免疫細胞分化の異常と関連づけられており、免疫介在性病態や、血液悪性腫瘍に伴う転写ネットワークの再配線という文脈で研究されています。

TCF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTCF7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TCF7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TCF7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TCF-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TCF-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TCF7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TCF-1の機能に不可欠なTCF7エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TCF7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TCF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTCF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TCF7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TCF-1 HDRプラスミド（h）および TCF-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTCF7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTCF7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。