Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
TCF-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401584
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TCF-1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TCF-1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TCF-1 Anticuerpo (C-5): sc-271453
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TCF-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401584 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
TCF7 codifica TCF-1, un factor de transcripción con caja HMG restringido a las células T que integra la señalización canónica Wnt/β-catenina con programas génicos que especifican el linaje. TCF-1 modela el desarrollo de los timocitos, sostiene el mantenimiento de los progenitores de células T y regula decisiones de diferenciación mediante activación o represión transcripcional dependiente del contexto, en cooperación con cofactores como β-catenina y Groucho/TLE. En linfocitos maduros, TCF-1 influye en estados asociados a funciones efectoras frente a memoria y contribuye a redes de cromatina y transcripción que gobiernan la homeostasis inmunitaria. La desregulación de programas dependientes de TCF7/TCF-1 se ha vinculado con una diferenciación alterada de las células inmunitarias y se estudia en el contexto de patología mediada por el sistema inmunitario y de la reprogramación transcripcional asociada a neoplasias hematológicas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TCF-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TCF7 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TCF7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TCF7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TCF-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TCF7 para la investigación de la señalización de TCF-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de TCF7 críticos para la función de TCF-1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TCF7 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TCF-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TCF-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TCF7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TCF-1 (h) y el plásmido HDR TCF-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TCF7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TCF7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.