TBL1XR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401998-ACT

TBL1XR1 (receptor 1 semelhante à beta da transducina ligado ao X) codifica um correagulador contendo repetições WD40 que participa do controlo transcricional ao fazer a ponte entre fatores de transcrição específicos de sequência e complexos modificadores da cromatina. Atua em múltiplos contextos de sinalização, incluindo vias de recetores nucleares e a transcrição associada a Wnt/β-catenina, e contribui para a troca dinâmica de conjuntos de correpressores e coativadores para ajustar programas de expressão génica. Por meio dessas funções, o TBL1XR1 influencia a diferenciação celular, a proliferação e estados transcricionais responsivos ao stress. A desregulação ou atividade alterada do TBL1XR1 tem sido associada a redes transcricionais aberrantes na biologia do cancro e a fenótipos do neurodesenvolvimento, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de regulação génica.

TBL1XR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TBL1XR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TBL1XR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TBL1XR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TBL1XR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TBL1XR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TBL1XR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TBL1XR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TBL1XR1 em células tumorais com expressão de TBL1XR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.