TAUT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402918-ACT

SLC6A6はヒトのタウリントランスポーターTAUTをコードしており、ナトリウムおよび塩化物依存性の膜輸送体として、高親和性のタウリン取り込みを担い、細胞内タウリンプールの維持に寄与する。タウリンは浸透圧調節、膜の安定化、カルシウム恒常性、酸化還元（レドックス）バランスに関与するため、TAUT活性は細胞ストレス適応、ミトコンドリア機能、アポトーシス制御と結び付けられる。SLC6A6/TAUTの発現変動やタウリン輸送能の変化は、網膜・心臓・神経系などの興奮性組織における組織特異的な脆弱性と関連して報告されており、代謝ストレスや神経変性の文脈で研究されている。さらに、タウリンの利用可能性は炎症シグナル伝達やプロテオスタシスにも影響することから、SLC6A6は酸化傷害およびミトコンドリア機能障害の経路レベルのモデルにおいて、しばしば解析対象となる。

TAUT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC6A6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TAUT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC6A6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC6A6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TAUTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC6A6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTAUT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC6A6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTAUT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。