Tau Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400136-ACT

O MAPT humano codifica a proteína associada a microtúbulos tau, um fator predominantemente neuronal que se liga aos microtúbulos e os estabiliza para dar suporte ao transporte axonal, ao crescimento de neuritos e à organização do citoesqueleto. A função da tau é regulada por modificações pós-traducionais, particularmente a fosforilação, que modula a afinidade pelos microtúbulos e influencia a dinâmica do citoesqueleto e o tráfego intracelular. A desregulação da expressão de MAPT e da homeostase da tau está associada a processos neurodegenerativos e à agregação proteica observada nas tauopatias, incluindo a doença de Alzheimer e a demência frontotemporal. Assim, o MAPT é amplamente estudado em vias que controlam a estabilidade dos microtúbulos, a integridade sináptica, a proteostase e respostas ao estresse associadas à neuroinflamação.

Tau O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAPT sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tau O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAPT em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAPT, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tau. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAPT nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tau no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tau em células tumorais com expressão de MAPT silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.