Plasmide CRISPR d'Activation (h) TASK-3: sc-403974-ACT

Le gène humain **KCNK9** code **TASK-3 (K2P9.1)**, un canal potassique à deux domaines pore (K2P) qui contribue à la conductance potassique de fuite (« leak ») de fond et participe à l’établissement du potentiel de membrane au repos ainsi qu’à l’excitabilité membranaire. TASK-3 est sensible au pH extracellulaire et module les propriétés de décharge dans les tissus excitables, reliant l’homéostasie ionique à des programmes de signalisation cellulaire tels que les voies dépendantes du calcium et la transcription régulée par l’activité. Par son effet sur la polarisation membranaire, TASK-3 influence des processus incluant la sécrétion neuronale et endocrine, la progression du cycle cellulaire et l’adaptation au stress métabolique ou hypoxique. Une expression ou une fonction altérée de KCNK9/TASK-3 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et a été étudiée dans le contexte de la biologie du cancer, où la signalisation bioélectrique dépendante des canaux potassiques peut affecter la prolifération et la survie.

TASK-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KCNK9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TASK-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KCNK9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KCNK9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TASK-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KCNK9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TASK-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TASK-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de KCNK9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.