Plasmide CRISPR/Cas9 KO TARC (m): sc-422837

Présentation

Ccl17 code pour la chemokine régulée par le thymus et l’activation (TARC/CCL17), une chemokine CC sécrétée qui se lie à CCR4 afin d’orienter la chimiotaxie de sous-populations de lymphocytes T exprimant CCR4, notamment les cellules Th2 et les lymphocytes T régulateurs. Dans les tissus immunitaires de la souris, TARC contribue au trafic des leucocytes, en modulant la composition et la polarisation des infiltrats inflammatoires et en coordonnant les réponses induites par les antigènes. L’expression de Ccl17 est fréquemment induite en aval de la signalisation cytokiniques et de l’activation des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR) dans les compartiments myéloïdes et stromaux, reliant ainsi les signaux de l’immunité innée au recrutement des cellules de l’immunité adaptative. Une dérégulation de la signalisation Ccl17/TARC est associée à une inflammation de type allergique et à des pathologies à médiation immunitaire, ce qui en fait une cible utile pour étudier les gradients de chemokines, l’inflammation des barrières et le dialogue croisé entre lymphocytes T et cellules myéloïdes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TARC (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccl17 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccl17, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccl17 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TARC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccl17 pour l'étude de la signalisation de TARC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccl17 essentiels à la fonction de TARC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccl17 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TARC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TARC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccl17. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TARC plasmide HDR (m) et le TARC (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccl17 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccl17 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.