TARC Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401905-ACT

CCL17 codifica a quimiocina regulada pelo timo e pela ativação (TARC), uma quimiocina CC secretada que promove a migração dirigida de células T que expressam CCR4, incluindo subpopulações polarizadas para Th2, para locais de inflamação. Ao moldar o tráfego de leucócitos e a comunicação entre células dendríticas e células T, a TARC contribui para o posicionamento de células imunes nos tecidos e para a coordenação de respostas mediadas por citocinas na rede de sinalização de quimiocinas. A expressão desregulada de CCL17/TARC é frequentemente estudada na inflamação alérgica e em outras patologias mediadas pelo sistema imune, nas quais gradientes quimiotáticos alterados influenciam a infiltração imune e a remodelação tecidual. Em sistemas modelo humanos, CCL17 serve como um readout acessível da ativação de circuitos inflamatórios e como um nó para investigar o comportamento do eixo quimiocina–receptor.

TARC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCL17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TARC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCL17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCL17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TARC. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCL17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TARC no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TARC em células tumorais com expressão de CCL17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.