TAP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402586-ACT

O NXF1 humano codifica o TAP, um receptor central de exportação de mRNA que acopla a transcrição e o processamento do pré‑mRNA ao transporte através do poro nuclear, ao formar um heterodímero com o NXT1 e interagir com nucleoporinas por meio de interações com repetições FG. O TAP liga-se a complexos adaptadores como o TREX e reconhece características das mRNPs para promover uma exportação nuclear eficiente, influenciando assim a expressão gênica global, a vigilância de RNA e o acoplamento do splicing à exportação. Ao regular a composição e a disponibilidade citoplasmática dos mRNAs, o NXF1/TAP impacta vias que incluem metabolismo de RNA, controle da tradução e programas de expressão gênica responsivos ao estresse. A desregulação da maquinaria de exportação de mRNA tem sido associada a alterações na homeostase do transcriptoma observadas em contextos de câncer e doenças neurodegenerativas, tornando o NXF1 um alvo relevante para estudos mecanísticos de transporte de RNA e fidelidade da expressão gênica.

TAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NXF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NXF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NXF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TAP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NXF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TAP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TAP em células tumorais com expressão de NXF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.