Tankyrase-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403925-ACT

TNKS2 codifica a Tankirase-2, um membro da família das poli(ADP-ribose) polimerases (PARP) que catalisa a PARilação para regular a estabilidade de proteínas e a dinâmica de sinalização. A Tankirase-2 modula a via Wnt/β-catenina ao PARilar os arcabouços AXIN, influenciando a renovação (turnover) da β-catenina, e também contribui para a homeostase dos telômeros, a progressão mitótica e a organização do citoesqueleto por meio de interações com TRF1 e outros substratos. Por essas conexões entre vias, alterações na atividade de TNKS2 podem remodelar programas transcricionais, a capacidade proliferativa e a arquitetura celular, tornando-o relevante para estudos de sinalização oncogênica, manutenção do genoma e comunicação cruzada (crosstalk) entre vias. TNKS2 também é usado como um nó mecanístico para dissecar a regulação dependente de PARP da proteostase mediada por ubiquitina.

Tankyrase-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNKS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tankyrase-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNKS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNKS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tankyrase-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNKS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tankyrase-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tankyrase-2 em células tumorais com expressão de TNKS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.